Caracterización molecular mediante RAPD de CEPAS de Leishamania aisladas de pacientes de la Microred de Kiteni

Abstract

Mediante la técnica de Amplificación al azar de fragmentos polimórficos (RAPD), utilizando el cebador OPC-20, se logró diferenciar los aislamientos provenientes de pacientes de la Microred de Salud de Kiteni, se aislaron 48 cepas de Leishmania a partir de lesiones cutáneas y/o mucosas. Se estandarizó la técnica a las condiciones del Laboratorio de Inmunología de la Facultad de Ciencias Biológicas de la UNSAAC; para lo cual se utilizó el DNA de cepas de referencia correspondiente a Leishmania (V.) braziliensis, Leishmania (V.) peruviana, Leishmania (V.) guyanensis, y Leishmania (V.) lainsoni; los productos de amplificación se revelaron mediante el uso de geles de agarosa al 1.5%. Con ayuda del documentador de geles y el software Quantity One, se procedió a determinar el tamaño molecular de los productos de amplificación de cada una de las cepas problema y los patrones utilizados. Para realizar la evaluación cuantitativa, se procedió a construir una matriz básica de datos teniendo en cuenta la presencia (1) y ausencia (O) de los productos de amplificación; utilizando el software Past se procedió a hallar el índice de similitud utilizando el índice de Jaccard, es así que se encontraron: 18 cepas cuyos índices de similaridad se encuentran entre 0.6 y 1.0 que corresponden a Leishmania (V.) braziliensis, 3 cepas cuyos índices de similaridad están entre 0.5 y 0.8 que corresponde a Leishmania (V.) guyanensis, 2 cepas cuyos índice de similaridad es 1.0 que corresponde a Leishmania (V.) lainsoni y 25 cepas cuyos índices de similaridad no se asemejaron a ningún patrón usado en el estudio y se señalan como Leishmania spp.