Caracterización de los niveles de expresión génica del ARNm y proteína del transportador KCC2 y CO-transportador NKCC1 en la corteza olfativa piriforme de ratas macho de vida postnatal

Abstract

En el presente estudio se caracterizó los niveles de expresión de ARNm y proteína del cotransportador KCC2 y transportador NKCC1 a partir del tejido de corteza piriforme. Se colectó el tejido de 25 ratas de la cepa Sprague Dawley, y se analizó la expresión génica y proteica del transportador KCC2 y cotransportador NKCC1 durante 5 periodos: DPN 5-8, DPN 11-14 DPN 15-18, DPN19-22 y adultos (DPN 134), mediante las técnicas moleculares RT-qPCR y Western Blot. El análisis molecular para el gen de interés Kcc2 y Nkcc1 se realizó con 2 genes de referencia “Gapdh y Hprt1”, para cada grupo experimental y fue determinado mediante la cuantificación relativa obtenida de los ciclos de cuantificación de cada muestra obtenidos de los ensayos de qPCR de tiempo real. Esta cuantificación relativa fue expresada en términos de cambios en el nivel de expresión génica (fold change, en inglés) de cada período postnatal estudiado en función del nivel de expresión de los animales adultos. El análisis de la expresión proteica de KCC2 y NKCC1, se realizó con la proteína de referencia “Actina” para cada grupo experimental. Los datos para la cuantificación se obtuvieron de la intensidad de las bandas de expresión para cada proteína mediante el programa ImageJ. Se determinó una relación en función al nivel de expresión de la proteína de interés y proteína de referencia (ratio). Los datos obtenidos fueron expresados en función al porcentaje de adulto. Los resultados mostraron que tanto la expresión génica y protéica de KCC2 es menor durante las dos primeras semanas en contraste con el adulto.